PENENTUAN COLIFORM
DENGAN CARA MPN /100
Persiapan :
Alat-alat :
1.
Sama dengan penentuan hitung bakteri total (PTC)
2.
Rak tabung
3.
Lup inokulasi
Media:
1.
Lauryl
tryptose broth double strength 5 tabung
2.
Lauryl
tryptose broth single strength 10 tabung
3.
Lactose broth single dan double
4.
Brilian Green Lactose Bile 2% broth.
5.
E.C Medium Broth
6.
Mac Conkay atau Endo
Reagensia : Sebagai pelarut.
1.
Air garam faali 0.9% steril.
2.
Air pepton 0.1%
Pembuatan larutan sempel uadang 1 : 10 atau produk lainya :
1.
Timbang 50 gr sampel daging udang yang akan
dianalisa secara steril dan dimasukan kedalam blender steril, lalu ditambah 450
ml air pepton 0.1% atau air garam faali 0.9%.
2.
Blender
selama 2 menit 15.000 – 20.000/ rpm.
3.
Pindahkan larutan yang diperoleh (1:10) kelabu
steril.
Spesimen :
1.
Udang segar dan uadang beku.
2.
Paha katak segar dan paha katak beku.
3.
Ikan segar atau ikan beku.
4.
Bekicot beku.
Cara pelaksanaannya :
1.
Untuk menentukan coliform secara MPN dapat
digunakan cara :
3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth
double strength.
3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth
single strength.
3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth
single strength atau sistem 3 :3 :3 dan 5 : 5 :5 (3seri).
2.
Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose
double strength ditambah 10 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiapa
tabung.
3.
Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose
single strength ditambh 1 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiap
tabung.
4.
Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose
single strength lainya ditambh 1 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiap
tabung. Setelah selesai penambahan larutan sampel, kocok tabung tersebut hingga
homogen dan inkubasikan 370 C kurang lebih 0.50C selama
24 jam.
5.
Sesudah inkubasi, amati tabung-tabung yang
menunjukan reaksi gas positif dan adanya gas lebih dari 10% dalam tabung durham
yang ada didalamnya.
6.
Tabung-tabung yang gas negatif diinkubasikan
ulang 370C selama 24 jam.
7.
Hitung masing-masing jumlah tabung yang gas
positif pada seri ke satu (10 ml larutan sampel), kedua (1ml larutan sampel)
dan seri ke 3 (0.1 ml larutan sampel).
8.
Selanjutnya cocokan dengan tabel MPN dari hoskin
J.K. dan hasil ini dinyatakan sebagai “ Presumptive coliform MPN /100 ml”.Tes
tersebut diatas disebut presumptive test atau tes pendahuluan.
Dari tabung-tabung reaksi yang positif gas
dilanjutkan ke Confirmasi test atau tes penegasan.
9.
Siapkan media
BGLB sejumlah tabung yang gas positif pada seri ke satu (10 ml larutan
sampel), seri kedua (1 ml larutan sampel), dan seri ketiga (0.1 ml larutan
sampel) dirak tabung.
10.
Inokulasikan atau mata lup inokulasi larutan
dari masing-masing tabung yang positif ke masing-masing tabung larutan BGLG 2%,
kemudian aduk sampai homogen.
11.
Inkubasikan pada suhu 370C sampai
kurang lebih 0.50C selama 24 jam. Sesudah inkubasi , amati adanya tabung-tabung
yang gas positif dalam tabung durham,hitung jumlahnya dan hasilnya diccocokan
dengan tabel MPN (hoskin JK) dan nyatakanlah sebagai “ Coliform-coliform :
MPN/100 ml”.
12.
Siapkan media E.C 1 strength dalam tabung yang
didalamnya terdapat tabung durham sebanyak BGLB diatas yang positif.
13.
Inokulasikan satu lup inokulasi dari
masing-masing tabung yang positif ke dalam masing-masing tabung yang berisi E.C
Medium, aduk sampai homogen.
14.
Inkubasikan pada suhu 44.50C selama
24 jam atau dipenangas air.
15.
Kemudian hitung jumlah tabung yang gas positif
dan cocokan dengan tabel MPN dan nyatakanlah sebagai “ Faecal-coliform MPN/100
ml”.
16.
Dari tabung yang gas positif, dengan lup
inokulasi diinokulasikan kedalam media agar EMB.
17.
Inkubasikan pada suhu 370C selam a 24
jam.
18.
Amatilah pertumbuhan koloni di EMB agar
tersebut.
19.
Koloni yang menunjukan warna merah kilap logam
berdiameter 2-3 mm, permukaanya datar atau sedikit cembung dinyatakan positif,
dan cocokan dengan tabel MPN dan hasilnya dinyatakan sebagai : “ E.Coli /100 ml
contoh “.
0 komentar:
Posting Komentar