PENENTUAN COLIFORM DENGAN CARA MPN /100

PENENTUAN COLIFORM DENGAN CARA MPN /100

Persiapan :

Alat-alat :

1.       Sama dengan penentuan hitung bakteri total (PTC)

2.       Rak tabung

3.       Lup inokulasi

Media:

1.       Lauryl  tryptose broth double strength 5 tabung

2.       Lauryl  tryptose broth single strength 10 tabung

3.       Lactose broth single dan double

4.       Brilian Green Lactose Bile 2% broth.

5.       E.C Medium Broth

6.       Mac Conkay atau Endo

Reagensia : Sebagai pelarut.

1.       Air garam faali 0.9% steril.

2.       Air pepton 0.1%

Pembuatan larutan sempel uadang 1 : 10 atau produk lainya :

1.       Timbang 50 gr sampel daging udang yang akan dianalisa secara steril dan dimasukan kedalam blender steril, lalu ditambah 450 ml air pepton 0.1% atau air garam faali 0.9%.

2.        Blender selama 2 menit 15.000 – 20.000/ rpm.

3.       Pindahkan larutan yang diperoleh (1:10) kelabu steril.

Spesimen :

1.       Udang segar dan uadang beku.

2.       Paha katak segar dan paha katak beku.

3.       Ikan segar atau ikan beku.

4.       Bekicot beku.

Cara pelaksanaannya :

1.       Untuk menentukan coliform secara MPN dapat digunakan cara :

      3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth double strength.

      3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth single strength.

      3 atau 5 tabung media Lauryl tryptose broth single strength atau sistem 3 :3 :3 dan 5 : 5 :5 (3seri).

2.       Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose double strength ditambah 10 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiapa tabung.

3.       Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose single strength ditambh 1 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiap tabung.

4.       Tiga atau lima tabung media Lauryl tryptose single strength lainya ditambh 1 ml larutan sampel uadang 1 : 10 pada tiap-tiap tabung. Setelah selesai penambahan larutan sampel, kocok tabung tersebut hingga homogen dan inkubasikan 37⁰ C kurang lebih 0.5⁰C selama 24 jam.

5.       Sesudah inkubasi, amati tabung-tabung yang menunjukan reaksi gas positif dan adanya gas lebih dari 10% dalam tabung durham yang ada didalamnya.

6.       Tabung-tabung yang gas negatif diinkubasikan ulang 37⁰C selama 24 jam.

7.       Hitung masing-masing jumlah tabung yang gas positif pada seri ke satu (10 ml larutan sampel), kedua (1ml larutan sampel) dan seri ke 3 (0.1 ml larutan sampel).

8.       Selanjutnya cocokan dengan tabel MPN dari hoskin J.K. dan hasil ini dinyatakan sebagai “ Presumptive coliform MPN /100 ml”.Tes tersebut diatas disebut presumptive test atau tes pendahuluan.

Dari tabung-tabung reaksi yang positif gas dilanjutkan ke Confirmasi test atau tes penegasan.

9.       Siapkan media  BGLB sejumlah tabung yang gas positif pada seri ke satu (10 ml larutan sampel), seri kedua (1 ml larutan sampel), dan seri ketiga (0.1 ml larutan sampel) dirak tabung.

10.   Inokulasikan atau mata lup inokulasi larutan dari masing-masing tabung yang positif ke masing-masing tabung larutan BGLG 2%, kemudian aduk sampai homogen.

11.   Inkubasikan pada suhu 37⁰C sampai kurang lebih 0.5⁰C selama 24 jam. Sesudah inkubasi , amati adanya tabung-tabung yang gas positif dalam tabung durham,hitung jumlahnya dan hasilnya diccocokan dengan tabel MPN (hoskin JK) dan nyatakanlah sebagai “ Coliform-coliform : MPN/100 ml”.

12.   Siapkan media E.C 1 strength dalam tabung yang didalamnya terdapat tabung durham sebanyak BGLB diatas yang positif.

13.   Inokulasikan satu lup inokulasi dari masing-masing tabung yang positif ke dalam masing-masing tabung yang berisi E.C Medium, aduk sampai homogen.

14.   Inkubasikan pada suhu 44.5⁰C selama 24 jam atau dipenangas air.

15.   Kemudian hitung jumlah tabung yang gas positif dan cocokan dengan tabel MPN dan nyatakanlah sebagai “ Faecal-coliform MPN/100 ml”.

16.   Dari tabung yang gas positif, dengan lup inokulasi diinokulasikan kedalam media agar EMB.

17.   Inkubasikan pada suhu 37⁰C selam a 24 jam.

18.   Amatilah pertumbuhan koloni di EMB agar tersebut.

19.   Koloni yang menunjukan warna merah kilap logam berdiameter 2-3 mm, permukaanya datar atau sedikit cembung dinyatakan positif, dan cocokan dengan tabel MPN dan hasilnya dinyatakan sebagai : “ E.Coli /100 ml contoh “.